免疫组织与细胞化学技术简介 免疫组织与细胞化学技术（immunohistochemistry and immunocytochemistry technique）是从组织与细胞化学方法衍生出来的。是在单克隆抗体技术产生后，利用免疫学原理，将抗原抗体反应应用于组织细胞化学而进一步通过级连放大，增加敏感性。最后用辣根过氧化物酶显色。从而定位组织细胞中抗原（蛋白 多肽、酶）等多种基因产物的特异方法。在病理学外检工作中可用于对不同来源，HE难以诊断的肿瘤进行确诊和鉴别诊断。 免疫组织化学技术的主要步骤与常用标记物 （一）主要步骤 ②切片 1.石蜡切片；2. 冰冻切片 ③封片 ④抗体标记组织切片 ⑤染色反应； ⑥显色，观察结果。 （二）常用标记物 常用免疫组织化学染色方法 （一） 直接法 将荧光素(免疫荧光法)或酶直接标记在第一抗体上，以检查相应的抗原。直接法具有特异性强的优点，但敏感性差，耗费抗体多。 （二）间接法 先用荧光素或酶标记第二抗体，一抗为特异性抗体， 二抗仅有种属特异性。 （三）PAP法与双PAP法：既过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法(Peroxidase Antiperoxidase Complex, PAP) 先将过氧化物酶（HRP）免疫兔/羊/鼠，制成兔/羊/鼠抗ＨＲＰ；然后再与ＨＲＰ结合，形成一个稳定的多角形结构（PAP （四）ABC法 既卵白素－生物素过氧化物酶复合物法(Avidin Biotin-peroxidase Complex,ABC) 利用卵白素与生物素特有的高度亲和力，先将生物素与酶结合形成生物素化HRP，再以生物素化HRP与卵白素按一定比例混合，形成一个复合物；同时先将二抗生物素化。 （五）SP法：即用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶(StreptAvidin Peroxidase conjugataed method，SP) 常用抗体的应用范围及选用 正确设置免疫组织化学的对照 1. 阴性对照
其基本原理是应用抗原与抗体接触后可形成“抗原－抗体复合物”的化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技术。
①固定
1．酶 为最常用的标记物。作为标记的酶应具有以下条件：
①底物是特异性的，且易于显示；
②酶反应产物稳定，不易扩散；
③容易获得纯酶分子且较稳定；
④酶标记抗体后，不影响两者的活性；
⑤被检组织中不应存在内源性相同的酶或其底物。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。
2．荧光素 指在高能量光波的激发下能产生荧光的物质。常用的有异硫氰酸荧光素（FITC）、四甲基异硫氰酸罗达明（TRITC）。
3．生物素 其与卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。
4．金属标记物 如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。
标记物
抗体
常见阳性肿瘤
上皮标记
广谱细胞角蛋白（CK/AE1/AE3）
上皮性肿瘤
上皮细胞膜抗原（EMA）
上皮源性肿瘤，尤其是低分化腺癌
软组织标记
广谱肌动蛋白（Actin）
肌源性肿瘤
结蛋白（Desmin）
肌源性肿瘤（肌细胞分化最早的标记）
波形蛋白（Vimentin）
间叶源性肿瘤
神经内分泌标记
突触素（SY）
嗜铬细胞瘤、节细胞神经瘤、APUD瘤
胶质纤维酸性蛋白（GFAP）
星形胶质细胞瘤
S-100蛋白
神经源性肿瘤，恶黑、脂肪肉瘤
神经元特异性烯醇化酶（NSE）
神经内分泌肿瘤（特异性较差）
淋巴造血组织标记
白细胞共同抗原（LCA）
造血组织肿瘤（造血细胞的特异性标记）
T细胞CD3
T细胞淋巴瘤
B细胞CD20
B细胞淋巴瘤
细胞周期素标记
周期素B1（Cyclin B1）
G2期和M期
周期素D1 (Cyclin D1)
G1期进入S期重要调控因子
周期素D2（Cyclin D2）
G1期进入S期重要调控因子
Ki-67 Antigen
S、G2、M期（G0期缺如）
增殖细胞核抗原（PCNA）
增殖细胞（S期、G1期、G2初期）
（一）对照原则：首先对照第一抗体；替代对照要注意相同的原则；阳性结果阴性对照，阴性结果阳性对照；染色清晰，定位准确(左、中、右图)。
左图：食管鳞癌 E-cad膜强阳性 中图：神经胶质细胞GFAP胞浆胞膜阳性 右图：肺硬化性血管瘤 TIF-1核阳性
⑴ 空白对照：用PBS替换一抗；
⑵ 血清替代对照：用同种动物的正常血清代替一抗；
⑶ 抑制对照：用未标记的抗体先和相应的抗原结合；
⑷ 吸收对照：用纯化的抗原对抗体先行吸收；
2.阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织；
3.自身对照：利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照。
（二）假阳性反应：
⑴ 非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等；
⑵ 发布日期：2010-8-31 【返回】